蛋白層析柱在蛋白,多肽,抗體等等行業(yè)中占據(jù)了重要的地位,廣泛應(yīng)用于制備分離的各類(lèi)化合物。蛋白層析柱在原有蛋白層析分離柱的特性上還兼具了以下特性:
1、耐高壓:允許實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用較高的流速,加快實(shí)驗(yàn)進(jìn)程以及適合硬基質(zhì)的色譜填料。
2、防爆性:可以選擇外貼防爆膜,防止玻璃管子爆裂,對(duì)人員造成傷害。
3、可重復(fù):一根柱管可多次使用,大大節(jié)約了您的成本。
4、可見(jiàn)性:分離帶顏色復(fù)雜天然產(chǎn)物,您可以直觀的看到分離色帶。
5、篩板:可以提供各種粒徑的篩板,優(yōu)良的分配效果,達(dá)到更好的分離度。
6、優(yōu)異的流體結(jié)構(gòu)。
蛋白質(zhì)層析通過(guò)利用蛋白質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中分配不同的原理進(jìn)行分離和純化。 蛋白質(zhì)層析技術(shù)是生物化學(xué)研究中的一個(gè)重要工具,它根據(jù)蛋白質(zhì)的物理和化學(xué)特性實(shí)現(xiàn)高效純化。
基本原理
定義:蛋白質(zhì)層析是一種利用蛋白質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間不同分配原理進(jìn)行分離純化的技術(shù)。
原理:不同蛋白質(zhì)具有不同的物理和化學(xué)特性,如分子大小、形狀、電荷和疏水性等。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液流經(jīng)固定相時(shí),各組分以不同強(qiáng)度的作用力結(jié)合在固定相上,從而實(shí)現(xiàn)分離。
主要類(lèi)型
凝膠過(guò)濾層析:利用蛋白質(zhì)分子的大小差異進(jìn)行分離。大分子無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒的孔隙,優(yōu)先洗脫;小分子則進(jìn)入孔隙,延后洗脫。
離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的差異進(jìn)行分離。通過(guò)改變pH或增加離子強(qiáng)度,使帶電蛋白質(zhì)與固定相的離子交換樹(shù)脂可逆結(jié)合并逐一洗脫。
親和層析:利用生物大分子的特異性親和力進(jìn)行分離。例如,通過(guò)基因工程引入特定標(biāo)簽,使目標(biāo)蛋白與配基特異性結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)高效純化。
疏水作用層析:通過(guò)蛋白質(zhì)疏水性差異進(jìn)行分離。在高鹽條件下蛋白質(zhì)疏水性增強(qiáng),與固定相疏水配基結(jié)合,然后逐步降低鹽濃度將蛋白質(zhì)洗脫。
蛋白層析柱的工作原理
1. 預(yù)處理:在吸附樹(shù)脂的生產(chǎn)過(guò)程中,一般采用的是工業(yè)級(jí)原料,產(chǎn)品沒(méi)有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化處理,樹(shù)脂內(nèi)部殘留少量單體,所以在使用之前,需用水溶性溶劑對(duì)其浸泡處理,然后用去離子水通過(guò)樹(shù)脂層,置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。
2. 逆流洗柱:用水洗出去水離子及破碎填料,樹(shù)脂裝入后,用蒸餾水反洗樹(shù)脂層,直至出水清晰、無(wú)氣味、無(wú)細(xì)碎樹(shù)脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹(shù)脂層,至出水呈中性為止。
3. 水洗:水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。
4. 吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以選取*條件。流出液每隔一段時(shí)間取樣檢測(cè),達(dá)泄漏點(diǎn)停止吸附,或多柱串聯(lián)達(dá)飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,該過(guò)程應(yīng)控制料液的速度及吸附量,大孔樹(shù)脂應(yīng)*浸泡在料液里,以提高吸附效果和運(yùn)行穩(wěn)定性。
5. 解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑,單柱吸附時(shí),解吸與吸附操作對(duì)流為佳。解吸劑沸點(diǎn)要低以便回收處理。
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